分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。它具有靈敏度高、操作簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的實(shí)驗(yàn)方法。下面讓我們一起深入了解分光光度實(shí)驗(yàn)及相關(guān)試劑。
實(shí)驗(yàn)原理及儀器
分光光度法的核心在于光的吸收。光源發(fā)出的光經(jīng)過單色器分解成單色光，通過待測樣品后，部分光被吸收，剩余的光被檢測器接收，轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)而得出吸光度。參照圖 1 所示，由以下儀器部件實(shí)現(xiàn)檢測過程：
光源：提供連續(xù)光譜的光源，如低壓鎢絲燈泡，用于產(chǎn)生波長約為 320~2500nm 的連續(xù)光譜。
單色器：如棱鏡或光柵，用于將復(fù)合光分解成特定波長的單色光。
吸收池：容納待測樣品，光通過此處時(shí)被樣品吸收。
檢測器：將透過樣品的光轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，常見的檢測器有光電池和光電管。

數(shù)據(jù)系統(tǒng)：顯示并記錄檢測器輸出的電信號(hào)，轉(zhuǎn)換為吸光度或透光率。

分光光度法的優(yōu)勢
靈敏度高：分光光度法可以檢測非常低的濃度，一般可測定濃度為 10-6mol/l～10-5mol/l，適用于微量組分的測定。
操作簡便：樣品處理成溶液后，可以不經(jīng)分離干擾物質(zhì)，一般只經(jīng)歷顯色和比色兩個(gè)步驟就可得出結(jié)果，從而縮短分析時(shí)間，加快測定速度。
測定快速：由于操作簡便，分光光度法可以快速得到結(jié)果，適合于需要快速分析的場合。
準(zhǔn)確度適當(dāng)：分光光度法的相對誤差一般為 2%～5%，對于微量組分的測定，已能滿足要求。
分光光度法中的添加劑
樣品溶液中的添加劑可以分為多種類型，它們在分光光度法中扮演著不同的角色，以增強(qiáng)分離效果或改善測定條件，以下是一些常見的添加劑分類：
顯色劑：與待測物質(zhì)反應(yīng)生成具有特定顏色的化合物，從而提高檢測的靈敏度和選擇性。例如，在測定鐵離子時(shí)，常用鄰二氮菲作為顯色劑，它與鐵離子形成紅色絡(luò)合物，在特定波長下有強(qiáng)烈吸收。
緩沖劑：維持溶液的 pH 值穩(wěn)定，因?yàn)樵S多顯色反應(yīng)受 pH 值影響較大。比如在某些測定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)中，需要使用磷酸鹽緩沖液來穩(wěn)定反應(yīng)體系的酸堿度。
掩蔽劑：與干擾物質(zhì)結(jié)合，使其不干擾待測物質(zhì)的測定。當(dāng)測定水樣中的銅離子時(shí)，如果存在鐵離子干擾，可加入氟離子作為掩蔽劑，氟離子與鐵離子形成穩(wěn)定絡(luò)合物，消除鐵離子對銅離子測定的干擾。
這些添加劑的選擇和使用取決于待測物質(zhì)的性質(zhì)、分析目的以及所需的分離效果。在實(shí)際應(yīng)用中，可能需要根據(jù)具體情況選擇合適的添加劑和濃度，以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。
分光光度法的應(yīng)用
分光光度法能夠應(yīng)用在多領(lǐng)域之下，以達(dá)到科研人員想要的目標(biāo)，例如：
環(huán)境監(jiān)測：測定水體中的化學(xué)需氧量、重金屬離子、有機(jī)污染物等。通過分光光度法可以快速檢測水中汞、鉛等重金屬離子濃度，判斷水質(zhì)是否達(dá)標(biāo)。
材料科學(xué)：分析材料的吸光、透光等光學(xué)性質(zhì)，用于新材料研發(fā)。在研究新型光學(xué)玻璃時(shí)，利用分光光度法測試其在不同波長下的透光率，評估玻璃的光學(xué)性能。
生物化學(xué)：用于測定蛋白質(zhì)、酶、激素等生物分子的濃度和活性。比如通過分光光度法測定酶催化反應(yīng)過程中底物或產(chǎn)物在特定波長下吸光度的變化，從而計(jì)算酶的活性。
分光光度實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑

像美國 hach 哈希氨氮試劑（NH3-N 試劑，TNT830，0.015 - 2），可用于分光光度法測定水體中的氨氮含量；德國默克 prove 600 紫外可見分光光度計(jì)配套的 Merck1.73018.0002 預(yù)裝試劑等，都是在各自檢測項(xiàng)目中常用的試劑產(chǎn)品。在選擇分光光度實(shí)驗(yàn)試劑時(shí)，需要綜合考慮試劑的適用范圍、靈敏度、穩(wěn)定性以及與實(shí)驗(yàn)儀器的兼容性等因素。同時(shí)，對于一些涉及有毒有害物質(zhì)的試劑（如某些含砷試劑），在使用過程中要嚴(yán)格遵守安全操作規(guī)程，做好防護(hù)措施，并妥善處理廢液，避免對環(huán)境造成污染。

目前受政策影響，進(jìn)口試劑價(jià)格會(huì)受到一定的波動(dòng)影響，后期也是不能確定。在國產(chǎn)的試劑品牌我們還可以選擇，麥克林，阿拉丁，國藥等等。都相關(guān)配套試劑實(shí)驗(yàn)使用。這些都屬于集思儀器代理品牌，折扣活動(dòng)多多。

分光光度實(shí)驗(yàn)及其相關(guān)試劑在眾多領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為科研、生產(chǎn)以及環(huán)境監(jiān)測等工作提供了有力的分析手段。希望通過本文的介紹，能讓大家對分光光度實(shí)驗(yàn)及相關(guān)試劑有更深入的認(rèn)識(shí)和了解，在實(shí)際工作和學(xué)習(xí)中更好地運(yùn)用這一技術(shù)。